Проба Кумбса

Проба Кумбса – исследование, широко применяемое в гематологии, для выявления антител прикрепленных к поверхности эритроцитов или растворенных в плазме.

Синонимы: антиглобулиновый тест, Coombs test, AGT, indirect/direct antiglobuline test, IAT, NAT, DAT, indirect/direct Coombs test

Проба Кумбса – это

анализ, с помощью которого выявляют иммунизированность и антитела к эритроцитам.

Проба Кумбса, используемая для диагностики гемолитических анемий, вызывает у врачей разнообразные мнения. Многие специалисты отмечают её важность в выявлении антител к эритроцитам, что позволяет точно определить причину анемии. Врачи подчеркивают, что данный тест особенно полезен в случаях, когда необходимо различить аутоиммунные и неаутоиммунные формы заболевания. Однако некоторые эксперты указывают на необходимость комплексного подхода к диагностике, так как проба Кумбса может давать ложноположительные или ложноотрицательные результаты. В связи с этим, врачи рекомендуют сочетать её с другими лабораторными исследованиями для более точной оценки состояния пациента. Таким образом, проба Кумбса остается важным инструментом в арсенале клиницистов, но требует внимательного и взвешенного подхода к интерпретации результатов.

Прямая проба Кумбса.

• прямая проба Кумбса – определяет антитела зафиксированные на поверхности эритроцитов. Проводится при подозрении на аутоиммунную гемолитическую анемию, гемолиз при аутоиммунных заболеваниях, после приема лекарств (метилдопа, пенициллин, хинин), после переливания крови и гемолитической болезни новорожденных.

Эритроциты были сенсибилизированы in vivo – к ним уже прочно прикреплены антитела, а добавление антиглобулиновой сыворотки (анти-IgG) вызывает склеивание сенсибилизированных клеток, что и видно невооруженным глазом.

• непрямая проба Кумбса – выявляет антиэритроцитарные антитела в плазме крови, выполняют перед переливанием крови и при беременности.

Антиэритроцитарные антитела — разновидность аутоантител, т.е. антител против собственных же тканей. Аутоантитело возникает при патологической реактивности иммунной системы на некоторые препараты, например, на высокие дозы пенициллина.

Эритроциты на своей поверхности содержат различные химические структуры (гликолипиды, сахариды, гликопротеины и протеины), в медицине именуемые антигенами. Человек наследует от родителей определенную карту антигенов на каждой красной клетке крови.

Антигены объединены в группы и подле этого кровь делят на несколько групп — по системе AB0, резус, Келл, Левис, Кидд, Даффи. Самые известные и значимые в работе врача — AB0 и резус-фактор (Rh).

Система AB0

В системе AB0 антигены (аглютиноген) А и В расположены на мембране эритроцита, а в крови циркулируют аглютинины —  альфа — α и бета — β. Аглютинин при контакте с аглютиногеном приводит к гемолизу, поэтому возможны следующие комбинации:

• только αβ — I группа крови
• A + β — II группа крови
• B + α — III группа крови
• A + B — IV группа крови

Варианты Aα и Bβ — невозможны.

Проба Кумбса, или прямой тест на антигены, вызывает разнообразные мнения среди медицинских специалистов и пациентов. Многие врачи отмечают, что этот тест является важным инструментом для диагностики гемолитических анемий и выявления несовместимости крови. Пациенты, проходящие тест, часто выражают благодарность за его простоту и информативность, так как результаты помогают понять причины их состояния. Однако некоторые люди высказывают опасения по поводу возможных ложноположительных или ложноотрицательных результатов, что может привести к ненужным переживаниям. В целом, Проба Кумбса воспринимается как надежный и необходимый метод, который, несмотря на некоторые недостатки, играет ключевую роль в современной медицине.

Проба Кумбса

Резус фактор крови — это сложная система, включающая более 40 антигенов на поверхности оболочки эритроцита, обозначаемых цифрами, буквами и символами. Чаще всего встречаются резус-антигены типа D (85 %), С (70 %), Е (30 %), е (80 %) — они же и обладают наиболее выраженной антигенностью — способностью стимулировать иммунную систему к синтезу антител. Система резус не имеет в норме одноимённых аглютининов (в плазме крови), но они могут появиться, если человеку с резус-отрицательной кровью перелить резус-положительную кровь.

Резус-принадлежность человека определяется наличием именно этих антигенов. Особо важный антиген эритроцитов – антиген D. Если он присутствует, то говорят о резус-положительной крови RhD, а если его нет – о резус-отрицательной Rhd.

Если к антигенам эритроцитов присоединится соответствующее антитело, то эритроцит разрушается – гемолизирует.

Непрямая проба Кумбса.

• первичная аутоиммунная гемолитическая анемия
• гемолитическая анемия при аутоиммунных, опухолевых, инфекционных заболеваниях
• лекарственная аутоиммунная гемолитическая анемия
• посттрансфузионная гемолитическая анемия (дни — месяцы)
• гемолитическая болезнь новорожденного (несовместимость по одной из групп крови)

• перед переливанием крови
• при беременности резус-отрицательной женщины

Аутоиммунная гемолитическая анемия (первичная) – классическое аутоиммунное заболевание с неизвестными причинами. Предполагают нарушение в процессе взаимодействия на уровне иммунной системы, что ведет к восприятию собственных эритроцитов как чужих. Клетки продуцируют антитела класса IgG (реагируют при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), присоединяясь к поверхности эритроцита запускают ряд ферментов (систему комплемента) и «продырявливают» стенку эритроцита, что приводит к его разрушению – гемолизу.

• усталость, общая слабость, раздражительность
• одышка
• боль в животе, тошнота
• темный цвет мочи
• боли в спине
• желтушное окрашивание кожи и слизистых оболочек
• увеличение печени, селезенки
• снижение количества эритроцитов и гемоглобина в общем анализе крови

Положительный результат прямой пробы Кумбса на 100% подтверждает диагноз аутоиммунной гемолитической анемии, доказывая ее аутоммунное происхождение. Одновременно отрицательный результат — не дает возможности  снять диагноз.

• системная красная волчанка
• синдром Эванса
• макроглобулинемия Вальденстрема
• пароксизмальная холодовая гемоглобинурия
• хронический лимфолейкоз
• лимфомы
• инфекционный мононуклеоз
• инфицирование микоплазмой пневмонии
• сифилис

Положительность антиглобулинового теста при данных заболеваниях не служит диагностическим критерием, а является одним из симптомов заболевания.

Причина гемолитической болезни новорожденных — несовместимость  групп крови у матери и плода, в большинстве случаев по системе резус, в одиночных — по системе АВ0, казуистично — по другим антигенам.

Резус-конфликт развивается, если у резус-отрицательной женщины плод унаследовал от отца резус-положительную кровь.

Заболевание у новорожденного развивается только в том случае, если мать уже выработала антитела к соответствующим антигенам, что бывает после предыдущих беременностей, родов, абортов, переливания несовместимой крови. Наиболее частая причина запуска синтеза антител к антигенам эритроцитарной оболочки — роды (фето-материнское кровотечение). Первые роды в основном проходят без осложнений, но вот последующие — чреваты гемолитической болезнью новорожденного в первые дни после рождения.

• желтушность кожи
• анемия
• бледность кожи и слизистых
• увеличение печени и селезенки
• нарушения дыхания
• отек всего тела
• возбуждение и постепенное угнетение центральной нервной системы

Непрямую пробу Кумбса проводят перед переливанием крови для оценки совместимости, а прямую пробу Кумбса — после него при подозрении на посттрансфузный гемолиз, т.е. при наличии симптомов, таких как лихорадка, озноб, поливость (читай ниже). Цель анализа – выявить антитела к перелитым эритроцитам, которые связались с эритроцитами получившего кровь и являются причиной посттрансфузного гемолиза, а также преждевременного удаления донорских эритроцитов из кровообращения у реципиента (того, кто получил кровь).

• повышение температуры тела
• сыпь на коже
• боли в спине
• красная окраска мочи
• тошнота
• головокружение

Стоит напомнить, что принципиальные правила расшифровки прямого и непрямого антиглобулинового теста одинаковы. Единственное отличие — расположение антител — в крови или уже на красной клетке крови — на эритроците.

• если прямая проба Кумбса отрицательна – это значит что на эритроцитах не «сидит» антитело и причину симптомов нужно искать дальше и провести непрямую пробу Кумбса
• если положительный результат пробы Кумбса выявлен после переливания крови, инфекций, лекарств – положительность может длится до 3 месяцев (время жизни эритроцитов 120 дней — 3 месяца)
• положительный результат антиглобулинового теста при аутоиммунном заболевании может длится месяцы и даже годы

• прямая проба Кумбса — отрицательно
• непрямая проба Кумбса — отрицательно

Качественно положительный результат измеряется в количестве плюсов от одного до четырех (+, ++, +++, ++++), а количественно в цифровом виде — 1:16, 1:256 и т.д.

• предложена впервые в Кэмбридже в 1945 году
• порог чувствительности — не менее 300 фиксированных молекул антител на одном эритроците
• число антител запускающих гемолиз — индивидуально для каждого человека (от 16-30 до 300)
• динамика других лабораторных показателей гемолитической анемии (гемоглобин, билирубин, ретикулоциты) может нормализоваться, а проба Кумбса останется на том же уровне

• нельзя определить силу связывания антигена с антителом
• неизвестно количество связанных антител
• не определяет вид антитела
• положительность пробы Кумбса не поможет определить ее причину
• 0,5% здоровых людей имеют положительную пробу Кумбса без каких-либо признаков гемолитической анемии
• не подходит для контроля успешности лечения, поскольку не укажет активность гемолиза эритроцитов

• общий анализ крови
• анализ крови на ретикулоциты
• микроскопия мазка крови
• биохимический анализ крови — печеночные пробы (билирубин, АСТ, АЛТ, ГГТ, щелочная фосфатаза), почечные пробы (мочевая кислота, мочевина, креатинин)
• ревмопробы — ревматоидный фактор, АСЛО, С-реактивный белок
• СОЭ
• гаптоглобин
• железо в крови
• ферритин
• осмотическая резистентность эритроцитов
• общий анализ мочи
• анализ кала

1. Возможна ли передача этих антител при донорстве крови?

Нет. При донорстве – донор отдает кровь, а не получает, поэтому нет возможности для появления антител.

2. 5-10-20 лет тому мне перелили кровь, стоит ли сейчас говорить об этом врачу перед новым переливанием крови?

Да. О том, что Вы получили трансфузию крови обязательно должен знать Ваш врач, поскольку она влияет на правильность расшифровки результатов анализов сейчас. При получении чужой (хоть и много раз проверенной крови) всегда существует вероятность того, что ваше тело выработает антитела против перелитой крови. Именно данные антитела окажут отрицательное влияние на состояние здоровья. При последующих переливаниях крови врач должен знать о том, что Вы уже получали трансфузии, а значит было время для синтеза антител. Для беременных женщин данная информация еще более актуальна.

3. Если несоответствие по резус-фактору между матерью и ребенку, будут ли больны все дети?

Зависит на резус-положительности или отрицательности ребенка (RhD). Носители группы крови I, II, III и IV могут быть как резус-положительны, так и отрицательны. В ситуации когда мать резус-отрицательна, а ребенок резус положителен – антитела будут вырабатываться уже с первой беременностью, но только после первых родов (или прерывания беременности) произойдет прямой контакт крови матери и ребенка. Реализация гемолитического влияния антител будет только при вторых и следующих родах, что приведет к гемолитической болезни у новорожденного.

Каждая женщина с отрицательным резус-фактором должна быть тщательно обследована во время беременности, а после родов проводится профилактическое лечение для предупреждения появления антител и дальнейших осложнений.

4. Во время беременности нужно ли знать группу крови мужа перед проведением пробы Кумбса?

Нужно не просто знать, но еще и проверить группу крови биологического отца ребенка во время беременности.

С помощью прямой пробы Кумбса выявляют антитела, связанные с эритроцитами, для диагностики гемолитических заболеваний и выявления причин анемии. Непрямая проба позволяет найти антитела, которые не связаны с эритроцитами, чтобы оценить возможность возникновения опасных ситуаций при переливании крови.

Положительная проба Кумбса говорит о факте резус-сенсибилизации организма, что является главной причиной резус-конфликта в случае переливания крови или при вынашивании ребенка с иным резус-статусом. В этом случае результаты сохраняются неизменными в течение 3-х месяцев.

С помощью непрямого антиглобулинового теста (непрямая проба Кумбса) выявляют антитела класса IgG против эритроцитов (ККТ) в плазме пациента. Проводят инкубацию плазмы пациента с эритроцитами реагента, затем добавляют сыворотку Кумбса (антитела к IgG человека или человеческие анти-IgG).

Непрямая проба Кумбса — непрямой антиглобулиновый тест. Он позволяет выявить атипичные антитела в плазме больных, в том числе аллоантитела к чужим антигенам эритроцитов. Исследование выполняется, когда прямая проба Кумбса оказалась отрицательной и антитела не были обнаружены.

Перед проведением пробы Кумбса убедитесь, что у вас есть все необходимые материалы и оборудование. Это включает в себя реактивы, пробирки, пипетки и другие инструменты, которые могут понадобиться для точного выполнения теста.

Обратите внимание на правильную технику забора крови. Для получения достоверных результатов важно, чтобы образец был взят стерильно и без загрязнений, а также чтобы соблюдались все правила хранения и транспортировки образца.

Тщательно изучите интерпретацию результатов пробы Кумбса. Понимание того, что означают положительные и отрицательные результаты, поможет вам правильно оценить состояние пациента и принять необходимые меры.

Не забывайте о важности консультации с опытным специалистом. Если у вас возникают сомнения в интерпретации результатов или в методике проведения теста, лучше обратиться за помощью к коллеге или врачу с большим опытом в данной области.